Panel genetic pentru amauroza congenitală Leber

Pe scurt

Testul citește aproape toate genele (secvențierea exomului) și le interpretează pentru pierderea severă a vederii din primele luni de viață, cauzată de o boală moștenită a retinei (amauroza congenitală Leber, LCA). Cuprinde toate cele 24 de gene cunoscute pentru această afecțiune. Este pentru sugarii și copiii care văd foarte slab încă de la naștere; medicul genetician stabilește, la consultație, dacă este testul potrivit.

Ce analizează

Testul citește, în aproape toate genele, porțiunile care conțin instrucțiunile pentru proteine (exonii, care împreună formează exomul), precum și ADN-ul mitocondrial. Interpretarea pornește de la afecțiunea pentru care se face testul: medicul genetician transmite semnele și istoricul familiei, iar raportul cuprinde variantele legate de această afecțiune, cu care persoana s-a născut, fie moștenite, fie apărute pentru prima dată la ea. Fiecare variantă se clasifică după criterii internaționale, de la fără efect (benignă) la cauzatoare de boală (patogenă). Separat, raportul poate cuprinde statutul de purtător pentru bolile recesive și descoperirile secundare din lista de gene ACMG: variante legate de alte afecțiuni, fără legătură cu motivul testării, pentru care există prevenție sau tratament. Le alegi la consimțământ, după discuția cu medicul genetician; pentru un copil, aleg părinții.

Exomul include toate cele 24 de gene cunoscute pentru afecțiune.

Ce raportează:

• schimbări ale unei singure „litere” din ADN (variante de un singur nucleotid, SNV), în toate genele care conțin instrucțiuni pentru proteine
• mici fragmente de ADN în plus sau lipsă (inserții și deleții mici, indeluri), în aceleași gene
• fragmente mai mari de ADN lipsă sau în plus (deleții și duplicații, CNV), pe care testul le vede doar în parte
• schimbări ale cromozomilor: un cromozom lipsă sau în plus (monosomii, trisomii), ambele copii ale unui cromozom moștenite de la același părinte (disomie uniparentală) sau un set întreg de cromozomi în plus (triploidie)
• variante ale ADN-ului mitocondrial
• variante cunoscute care cauzează boli, din afara porțiunilor care conțin instrucțiuni pentru proteine (variante necodante)
• o variantă de un singur nucleotid prezentă doar într-o parte dintre celule (mozaicism), de la o fracție alelică de peste 5%

Pentru cine este

• sugar cu vedere foarte slabă din primele luni, nistagmus și pupile care reacționează slab la lumină;
• copil care își apasă sau își freacă des ochii cu pumnii (semnul oculo-digital);
• copil sub 5 ani cu pierdere severă a vederii și un răspuns electric al retinei (electroretinogramă) foarte scăzut sau absent;
• copil cu LCA la care se discută un tratament țintit sau includerea într-un studiu clinic;
• părinți ai unui copil cu LCA care vor să știe riscul pentru o altă sarcină.

Ce poate arăta rezultatul

• Pozitiv: s-au găsit două variante care cauzează boala (patogene) în aceeași genă recesivă sau o variantă într-o genă dominantă, iar rezultatul poate confirma diagnosticul. Gena exactă contează: pentru o formă există un tratament țintit aprobat (vezi întrebările frecvente). Diagnosticul arată și ce alte organe merită verificate; pentru o sarcină viitoare, familia poate discuta opțiunile cu medicul genetician și cu medicul obstetrician.
• Negativ: în genele analizate nu s-a găsit o cauză. Conform MedlinePlus Genetics, la 20–30% dintre persoanele cu LCA cauza genetică nu se găsește nici cu testele actuale. Dacă suspiciunea rămâne, pasul următor pe care îl discutăm de obicei la consultație este secvențierea întregului genom (WGS), care citește și genele și regiunile din afara acestei analize.
• Variantă de semnificație incertă (VUS): o modificare despre care nu se știe încă dacă cauzează boala. Testarea părinților ajută: într-o boală recesivă, cele două variante trebuie să vină de la părinți diferiți.

Ce nu poate detecta

• Testul nu este potrivit pentru modificările apărute doar într-o tumoră (variante somatice), pentru demență, bolile psihiatrice sau bolile neurodegenerative care încep târziu și nici pentru probe recoltate în sarcină (prenatale).
• Nu vede fragmentele de cromozom care și-au schimbat locul (translocațiile), moștenirea doar a unei porțiuni de cromozom de la un singur părinte (disomia uniparentală parțială), semnele chimice care pornesc sau opresc genele (metilarea), schimbul de secvență între gene foarte asemănătoare (conversiile genice), variantele prezente în foarte puține celule (mozaicism sub 5%) și variantele prezente într-o mică parte din ADN-ul mitocondrial (heteroplasmie sub 5%).
• Nu vede secvențele scurte repetate de prea multe ori (expansiunile de repetiții); pentru ele se face un test țintit.
• Interpretarea se sprijină pe informațiile clinice și pe istoricul familial transmise: dacă acestea sunt incomplete sau greșite, și interpretarea poate fi.
• Pe măsură ce bazele de date cu variante cresc, o variantă raportată poate fi reclasificată.
• O variantă poate să nu fie recunoscută drept cauza bolii, pentru că funcția unor gene și efectul unor variante nu sunt încă bine cunoscute.

Ca orice exom, testul nu vede sigur:

• majoritatea variantelor din afara exonilor, de exemplu din regiunile care reglează genele;
• unele porțiuni lipsă sau în plus (deleții și duplicații), mai ales cele mici, de un singur exon;
• genele cu „copii” aproape identice în altă parte a genomului;
• de obicei, dacă și când vor apărea semnele sau cât de severe vor fi: aceeași variantă se poate manifesta diferit în aceeași familie.

Cum se face

Proba poate fi un frotiu bucal (de pe interiorul obrazului), sânge, câteva picături de sânge uscate pe un card (DBS), salivă sau ADN deja extras într-un laborator calificat. Rezultatul este gata în aproximativ 20 de zile lucrătoare de la primirea probei în laborator. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: secvențierea exomului prin secvențiere de nouă generație (NGS), după îmbogățirea exonilor genelor care codifică proteine și a ADN-ului mitocondrial; acoperire medie de cel puțin 100×, cu 99,7% din regiunile țintă acoperite de cel puțin 20 de ori; raportul cuprinde variantele legate de indicația pentru care s-a cerut testul
• Variante raportate: variante de un singur nucleotid (SNV), în toate genele care codifică proteine; mici inserții și deleții (indeluri), în toate genele care codifică proteine; deleții și duplicații mai mari (CNV), cu detecție limitată; anomalii cromozomiale: monosomii, trisomii, disomie uniparentală, triploidie; variante ale ADN-ului mitocondrial; variante necodante cunoscute ca producătoare de boală; mozaicism pentru variantele de un singur nucleotid, de la o fracție alelică de peste 5%
• Gene (24)

  • AIPL1
  • ALMS1
  • CEP290
  • CRB1
  • CRX
  • GUCY2D
  • IFT140
  • IMPDH1
  • INPP5E
  • IQCB1
  • KCNJ13
  • LCA5
  • LRAT
  • MERTK
  • NMNAT1
  • PROM1
  • PRPH2
  • RD3
  • RDH12
  • RPE65
  • RPGRIP1
  • SPATA7
  • TULP1
  • USP45
• Probă: frotiu bucal, sânge, picătură de sânge uscată pe card (DBS), salivă sau ADN deja extras într-un laborator calificat
• Durată: 20 de zile lucrătoare

Context clinic

• Forme sindromice: rinichi (CEP290, IQCB1, INPP5E, IFT140); inimă, auz și metabolism (ALMS1, sindromul Alström).
• Terapia genică aprobată de EMA pentru variantele bialelice RPE65 este voretigene neparvovec, la pacienții care mai au suficiente celule retiniene viabile.