Detecția prin FISH a amplificării MYCN pe țesut tumoral (neuroblastom)

Pe scurt

Testul arată, cu sonde fluorescente văzute la microscop (FISH), dacă celulele unui neuroblastom au un număr mult crescut de copii ale genei MYCN (amplificarea MYCN). Rezultatul este unul dintre criteriile după care echipa de oncologie pediatrică încadrează tumora într-o grupă de risc și alege cât de intens să fie tratamentul. Se face pe țesutul tumoral deja recoltat la biopsie sau la operație.

Ce analizează

Neuroblastomul este o tumoră a copilăriei care pornește din celulele nervoase imature ale sistemului nervos simpatic. Gena MYCN controlează creșterea acestor celule în timpul dezvoltării. În unele neuroblastoame, celulele tumorale au zeci sau sute de copii ale genei.

FISH înseamnă hibridizare in situ fluorescentă. Pe o secțiune subțire din tumoră se aplică o sondă care strălucește pe gena MYCN și, de obicei, o sondă de referință pe cromozomul 2, pe care se află gena. Specialistul numără la microscop semnalele din nucleele celulelor tumorale. Conform consensului internațional INRG din 2009, amplificarea înseamnă de peste patru ori mai multe semnale MYCN decât semnale de referință; un număr mai mic de copii în plus se numește câștig (gain). Pentru că privește celulă cu celulă, metoda vede și amplificarea prezentă doar în unele zone ale tumorii.

Pentru cine este

• copil cu neuroblastom nou diagnosticat, înainte de stabilirea grupei de risc;
• copil cu ganglioneuroblastom, când echipa medicală cere statusul MYCN;
• biopsie la care analiza MYCN nu s-a putut face sau a fost neconcludentă;
• recidivă, când oncologul pediatru vrea reevaluarea tumorii.

Ce poate arăta rezultatul

• MYCN amplificat. În clasificarea INRG, statusul MYCN este unul dintre factorii cu cea mai mare valoare pentru estimarea evoluției (prognostică), alături de vârstă, stadiu, aspectul la microscop (histologie), numărul total de cromozomi din celulele tumorii (ploidie) și modificările cromozomului 11q. Amplificarea orientează, de regulă, spre grupa de risc înalt și spre un tratament mai intens, stabilit de echipa de oncologie pediatrică.
• Câștig MYCN. Câteva copii în plus, sub pragul de amplificare. Echipa interpretează rezultatul împreună cu ceilalți factori.
• Fără amplificare. Grupa de risc depinde atunci de vârstă, stadiu, histologie și de celelalte analize genetice ale tumorii.
• Amplificare heterogenă. Doar o parte din celulele tumorale sunt amplificate. Conform consensului INRG din 2009, semnificația acestei situații nu era bine cunoscută; echipa medicală o interpretează împreună cu ceilalți factori.

Ce nu poate detecta

• Modificările brațului lung al cromozomului 11 (11q), ploidia tumorii și alte modificări cromozomiale, care se analizează separat.
• Mutațiile genelor tumorii, de exemplu ALK.
• O predispoziție moștenită: amplificarea MYCN apare doar în celulele tumorii. Dacă istoricul familial ridică întrebarea, discutăm la consultație un test genetic din sânge.
• Amplificarea, dacă zona analizată nu conține celule tumorale.

Cum se face

De obicei nu e nevoie de o recoltare nouă: se folosește blocul de parafină din biopsie sau din operație, păstrat de serviciul de anatomie patologică, împreună cu buletinul histopatologic; se acceptă și măduvă osoasă, recoltată pe heparină de litiu. Medicul anatomopatolog alege zona cu celule tumorale; conform consensului INRG, FISH-ul poate fi interpretat și când proba conține mai puține celule tumorale decât cer alte metode. Rezultatul vine, de obicei, în 11 zile lucrătoare de la primirea probei în laborator. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: hibridizare fluorescentă in situ (FISH)
• Variante raportate: amplificarea genei MYCN (regiunea 2p24.3)
• Probă: țesut fixat în formol și inclus în parafină (bloc FFPE sau 4–6 secțiuni), lame citogenetice necolorate (2 lame pentru fiecare sondă), sânge periferic pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml), măduvă osoasă pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml) sau suspensie de celule fixate (un tub pentru fiecare cultură)
• Durată: 11 zile lucrătoare