Detecția prin FISH a rearanjamentelor ALK pe țesut tumoral

Pe scurt

Testul arată, cu sonde fluorescente văzute la microscop (FISH), dacă gena ALK s-a rupt și s-a unit cu o altă genă (rearanjament) în celulele unei tumori, pe țesutul deja recoltat la biopsie sau la operație. Se folosește mai ales în cancerul pulmonar fără celule mici (NSCLC) avansat, unde pentru tumorile cu fuziune ALK există un tratament țintit. Testul se alege împreună cu medicul oncolog, în funcție de analizele deja făcute pe tumoră.

Ce analizează

Gena ALK se află pe cromozomul 2. În unele tumori, cromozomul se rupe în dreptul genei, iar capetele se lipesc greșit: ALK se unește cu o altă genă, de exemplu EML4 în cancerul pulmonar. Rezultă o proteină de fuziune care trimite celulei semnale continue de creștere. Denumirea testului numește două tipuri de rearanjament: pierderea unei porțiuni din brațul scurt al cromozomului 2, del(2p), și schimbul de material dintre cromozomii 2 și 5, t(2;5).

FISH înseamnă hibridizare in situ fluorescentă. Pe o secțiune subțire din tumoră se aplică sonde fluorescente, de obicei două, de culori diferite, câte una pentru fiecare capăt al genei ALK. Într-o celulă normală, cele două semnale stau lipite. Când gena este rearanjată, semnalele se despart sau rămâne vizibil doar unul dintre ele. Specialistul numără la microscop nucleele cu semnale separate și stabilește dacă proporția lor depășește pragul de pozitivitate.

Pentru cine este

• cancer pulmonar fără celule mici avansat, non-scuamos (de exemplu adenocarcinom), la diagnostic;
• cancer pulmonar scuamos la o persoană tânără, nefumătoare sau fostă fumătoare ușoară;
• un rezultat ALK neclar la testul făcut deja pe tumoră sau nevoia confirmării printr-o a doua metodă;
• limfom anaplazic cu celule mari, când medicul anatomopatolog cere confirmarea rearanjamentului ALK.

Ce poate arăta rezultatul

• ALK rearanjat (pozitiv). Tumora are o fuziune ALK. Conform ghidului ESMO din 2023, rearanjamentele ALK se caută în NSCLC non-scuamos avansat, iar pentru un rezultat pozitiv există un tratament țintit. Alegerea lui aparține medicului oncolog.
• Fără rearanjament (negativ). Nu s-a găsit o fuziune ALK în celulele analizate. Alte ținte de tratament (EGFR, ROS1, KRAS, BRAF, MET, RET, NTRK, HER2) se caută separat.
• Neconcludent. Când proba are prea puține celule tumorale sau semnalele sunt slabe din cauza felului în care a fost conservat țesutul (fixarea), rezultatul nu poate fi interpretat.

Ce nu poate detecta

• Partenerul de fuziune: FISH arată că gena ALK s-a rupt, nu și cu ce genă s-a unit.
• Unele rearanjamente cu tipar atipic, greu de văzut la FISH. Pentru fuziuni, ESMO preferă secvențierea NGS pe ARN.
• Schimbările mici, de o singură „literă”, din gena ALK (mutații punctiforme), care apar sub tratament și produc rezistență.
• Celelalte gene ale tumorii; ESMO recomandă, unde sunt disponibile, panelurile NGS care caută mai multe ținte deodată.
• Un risc moștenit de cancer: rearanjamentul apare doar în celulele tumorii.

Cum se face

De obicei nu e nevoie de o recoltare nouă: se folosește blocul de parafină din biopsie sau din operație (sau 4–6 secțiuni din el), păstrat de serviciul de anatomie patologică, împreună cu buletinul histopatologic. Se pot trimite și lame necolorate. Medicul genetician îți spune ce documente se trimit. Rezultatul vine, de obicei, în 14 zile lucrătoare de la primirea probei în laborator. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: hibridizare fluorescentă in situ (FISH)
• Variante raportate: rearanjamente ale genei ALK, de tip del(2p) și t(2;5)
• Probă: țesut fixat în formol și inclus în parafină (bloc FFPE sau 4–6 secțiuni), lame citogenetice necolorate (2 lame pentru fiecare sondă), sânge periferic pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml), măduvă osoasă pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml) sau suspensie de celule fixate (un tub pentru fiecare cultură)
• Durată: 14 zile lucrătoare

Context clinic

• Conform ESMO 2023, imunohistochimia ALK cu anticorpi performanți și validați este o alternativă echivalentă cu FISH; FISH-ul se adaugă la o imunohistochimie neclară sau pentru confirmare.
• Un rezultat pozitiv în NSCLC orientează tratamentul spre inhibitorii ALK; alegerea medicamentului aparține oncologului.
• Limfomul anaplazic cu celule mari rămâne în indicații pentru că denumirea testului include t(2;5) (NPM1::ALK); acolo, FISH-ul confirmă rearanjamentul la cererea anatomopatologului.