Detecția prin FISH a rearanjamentelor ROS1 pe țesut tumoral

Pe scurt

Testul arată, cu sonde fluorescente văzute la microscop (FISH), dacă gena ROS1 s-a rupt și s-a unit cu o altă genă (rearanjament) în celulele unei tumori, pe țesutul deja recoltat la biopsie sau la operație. Se folosește în cancerul pulmonar fără celule mici (NSCLC) avansat, unde pentru tumorile cu fuziune ROS1, deși rare, există un tratament țintit. Testul se alege împreună cu medicul oncolog, în funcție de analizele deja făcute pe tumoră.

Ce analizează

Gena ROS1 se află pe cromozomul 6. În unele tumori, cromozomul se rupe în dreptul genei, iar ROS1 se unește cu o altă genă. Rezultă o proteină de fuziune care trimite celulei semnale continue de creștere și de care depinde tumora.

FISH înseamnă hibridizare in situ fluorescentă. Pe o secțiune subțire din tumoră se aplică sonde fluorescente, de obicei două, de culori diferite, câte una pentru fiecare capăt al genei ROS1. Într-o celulă normală, semnalele stau lipite. Când gena este rearanjată, ele se despart sau rămâne vizibil doar unul dintre ele. Specialistul numără la microscop nucleele cu semnale separate și stabilește dacă proporția lor depășește pragul de pozitivitate.

Pentru cine este

• cancer pulmonar fără celule mici avansat, non-scuamos, la care ROS1 nu a fost analizat într-un panel de gene;
• un rezultat ROS1 pozitiv la testul de triere (screening) făcut pe tumoră, la care medicul vrea confirmarea printr-o altă metodă;
• tumoră fără modificări în EGFR sau ALK, la care se caută alte ținte de tratament;
• cancer pulmonar scuamos la o persoană tânără, nefumătoare sau fostă fumătoare ușoară.

Ce poate arăta rezultatul

• ROS1 rearanjat (pozitiv). Tumora are o fuziune ROS1. Conform ghidului ESMO din 2023, rearanjamentele ROS1 se caută în NSCLC non-scuamos avansat, iar pentru un rezultat pozitiv există un tratament țintit. Alegerea lui aparține medicului oncolog.
• Fără rearanjament (negativ). Nu s-a găsit o fuziune ROS1 în celulele analizate. Dacă suspiciunea rămâne, de exemplu după un test de screening pozitiv, se poate discuta o metodă pe ARN.
• Neconcludent. Când proba are prea puține celule tumorale sau semnalele sunt slabe din cauza felului în care a fost conservat țesutul (fixarea), rezultatul nu poate fi interpretat.

Ce nu poate detecta

• Partenerul de fuziune: FISH arată că gena ROS1 s-a rupt, nu și cu ce genă s-a unit.
• Unele fuziuni produse de rearanjamente mici pe același cromozom, care pot scăpa analizei FISH. Pentru fuziuni, ESMO preferă secvențierea NGS pe ARN.
• Mutațiile ROS1 care apar sub tratament și produc rezistență.
• Celelalte gene ale tumorii, căutate de preferat într-un panel NGS.
• Un risc moștenit de cancer: rearanjamentul apare doar în celulele tumorii.

Cum se face

De obicei nu e nevoie de o recoltare nouă: se folosește blocul de parafină din biopsie sau din operație, păstrat de serviciul de anatomie patologică, împreună cu buletinul histopatologic și, dacă există, rezultatele testelor ROS1 anterioare. Se pot trimite și secțiuni din bloc sau lame necolorate. Rezultatul vine, de obicei, în 14 zile lucrătoare de la primirea probei în laborator. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: hibridizare fluorescentă in situ (FISH)
• Variante raportate: rearanjamente ale genei ROS1
• Probă: țesut fixat în formol și inclus în parafină (bloc FFPE sau 4–6 secțiuni), lame citogenetice necolorate (2 lame pentru fiecare sondă), sânge periferic pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml), măduvă osoasă pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml) sau suspensie de celule fixate (un tub pentru fiecare cultură)
• Durată: 14 zile lucrătoare

Context clinic

• Conform ESMO 2023, imunohistochimia ROS1 poate fi folosită ca metodă de screening, iar FISH-ul rămâne metoda standard de detecție; un rezultat imunohistochimic pozitiv se confirmă înainte de tratament.
• Un rezultat pozitiv orientează tratamentul spre inhibitorii ROS1; alegerea medicamentului aparține oncologului.