Detecția prin FISH a deleției 13q14.3

Pe scurt

Testul verifică, printr-o analiză la microscop cu sonde fluorescente (FISH), dacă o mică regiune a cromozomului 13, numită 13q14.3, lipsește din celulele unei leucemii limfocitare cronice (LLC) sau ale unei boli înrudite. Deleția 13q este una dintre modificările urmărite de medicul hematolog pentru a estima evoluția bolii. Se face din sânge sau din măduvă și privește celulele bolnave, nu ADN-ul moștenit.

Ce analizează

Testul folosește un fragment scurt de ADN marcat cu o substanță fluorescentă (sondă), care se lipește doar de regiunea căutată; metoda se numește hibridizare fluorescentă in situ (FISH). Testul folosește sonda D13S319, din regiunea 13q14.3. La microscop, fiecare copie a regiunii apare ca un punct luminos. O celulă normală are două puncte, câte unul pe fiecare cromozom 13; o celulă cu deleție are unul sau niciunul.

Analiza se face pe nucleii celulelor care nu se divid (în interfază), deci nu are nevoie de culturi celulare, iar în LLC limfocitele bolnave se pot analiza direct din sânge. Laboratorul numără nucleii cu semnal anormal și raportează procentul lor.

Deleția 13q este cea mai frecventă modificare găsită prin FISH în LLC.

Pentru cine este

• persoană cu leucemie limfocitară cronică, în afara unei decizii de tratament, când medicul hematolog vrea să verifice doar această regiune;
• persoană cu limfom limfocitic cu celule mici sau cu altă boală în care limfocitele B se înmulțesc anormal (boală limfoproliferativă cu celule B), la indicația medicului hematolog;
• completarea unei analize anterioare, când doar regiunea 13q14.3 mai trebuie verificată;
• urmărirea unei deleții 13q cunoscute, când medicul hematolog o cere.

Conform ghidului iwCLL din 2018, înainte de începerea tratamentului se recomandă FISH din sânge pentru deleția 13q, deleția 11q, deleția 17p și trisomia 12. Pentru această evaluare se alege, de regulă, panelul care le cuprinde pe toate patru, nu testul pentru o singură regiune.

Ce poate arăta rezultatul

• Deleție prezentă. Raportul dă procentul de celule cu deleție.
• Deleție absentă. Regiunea este prezentă în ambele copii în celulele analizate. Rezultatul nu spune nimic despre celelalte regiuni importante în LLC.
• Rezultat la limită. Când procentul de celule cu modificarea este apropiat de pragul laboratorului, rezultatul se interpretează împreună cu celelalte analize și, uneori, testul se repetă.

Rezultatul nu decide singur tratamentul: medicul hematolog ține cont de evoluția bolii și de celelalte analize.

Ce nu poate detecta

• Modificările altor regiuni, cum sunt deleția 17p (gena TP53), deleția 11q (gena ATM) sau trisomia 12.
• Schimbările din interiorul genei TP53 (mutațiile) și starea genelor de anticorpi din celulele leucemiei (statutul mutațional IGHV), care se determină prin teste moleculare.
• Deleții foarte mici, din afara regiunii acoperite de sondă.
• O deleție prezentă în prea puține celule, sub pragul laboratorului.
• Riscul moștenit de boală.

Cum se face

Proba este de sânge din venă (cel puțin 3 ml), recoltat într-un centru partener, sau de măduvă osoasă extrasă cu un ac de medicul hematolog (aspirat de măduvă, cel puțin 1 ml); ambele se recoltează pe heparină de litiu. Rezultatul vine, de obicei, în 9 zile lucrătoare de la primirea probei. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: hibridizare fluorescentă in situ (FISH), cu sondă D13S319 pentru regiunea 13q14.3
• Variante raportate: deleția regiunii 13q14.3
• Probă: sânge periferic pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml), măduvă osoasă pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml), suspensie de celule fixate (un tub pentru fiecare cultură), lame citogenetice necolorate (2 lame pentru fiecare sondă) sau țesut fixat în formol și inclus în parafină (bloc FFPE sau 4–6 secțiuni)
• Durată: 9 zile lucrătoare

Context clinic

• Döhner și colab. (2000): deleția 13q a fost găsită la 55% dintre pacienții cu LLC; ca unică modificare, s-a asociat cu cea mai lungă perioadă fără tratament dintre grupurile genetice analizate.
• Înaintea unei decizii de tratament, iwCLL 2018 recomandă panelul FISH cu patru regiuni (13q, 11q, 17p, +12) și analiza mutațiilor TP53; testul pentru o singură regiune rămâne pentru completarea unei analize sau pentru urmărirea unei deleții cunoscute.