Detecția prin FISH a rearanjamentelor KMT2A (11q23.3)

Pe scurt

Testul caută, printr-o analiză la microscop cu sonde fluorescente (FISH), dacă gena KMT2A, cunoscută și ca MLL, aflată pe cromozomul 11, în regiunea 11q23.3, s-a rupt și s-a lipit de o regiune de pe alt cromozom (rearanjament). Se face de obicei din măduva osoasă, dar se poate face și din sânge, la persoanele cu leucemie acută, mieloidă sau limfoblastică, la orice vârstă. Rezultatul contează pentru încadrarea leucemiei și pentru estimarea riscului.

Ce analizează

Testul folosește fragmente scurte de ADN marcate cu o culoare fluorescentă (sonde), care se lipesc de o regiune precisă a unui cromozom; metoda se numește hibridizare fluorescentă in situ (FISH). La microscop, fiecare regiune marcată apare ca un punct colorat, iar specialistul urmărește aceste puncte în multe celule, una câte una.

Gena KMT2A reglează pornirea altor gene în timpul formării celulelor sângelui. Când se rupe și se lipește de o altă genă, rezultă o proteină de fuziune care ține celulele imature și le face să se înmulțească. Gena se poate uni cu multe gene partenere diferite. Testul arată dacă gena KMT2A s-a rupt.

Pentru cine este

• leucemie acută mieloidă nou diagnosticată, pentru încadrarea bolii după modificările ei genetice;
• leucemie acută limfoblastică, inclusiv la sugari;
• leucemie acută apărută după un tratament anterior cu chimioterapie;
• cariotip din măduvă nereușit, neclar sau cu o modificare în regiunea 11q23, care trebuie confirmată.

Ce poate arăta rezultatul

• Rearanjament KMT2A prezent. Partenerul contează pentru încadrare: conform clasificării riscului genetic European LeukemiaNet (ELN) din 2022, în leucemia acută mieloidă translocația t(9;11) cu gena MLLT3 se încadrează la risc intermediar, iar celelalte rearanjamente KMT2A la risc advers (nefavorabil). De aceea, rezultatul se citește împreună cu cariotipul și, la nevoie, cu un test care identifică fuziunea.
• Rearanjament absent. Gena KMT2A nu apare ruptă în celulele analizate. Leucemia poate avea alte modificări genetice, care se caută prin cariotip și prin alte teste.
• Rezultat atipic. Uneori apare un tipar neobișnuit al semnalelor. La consultație îți explicăm ce înseamnă și dacă e nevoie de un test complementar.

Ce nu poate detecta

• dublarea unei porțiuni din interiorul genei KMT2A (duplicația parțială în tandem, KMT2A-PTD), care se caută prin alte metode;
• schimbările din interiorul genelor (mutațiile), care se caută prin secvențiere;
• unele modificări relevante, care pot rămâne neidentificate din cauza limitelor actuale ale tehnologiei sau ale cunoștințelor medicale; uneori, rezultatul nu este concludent;
• riscul moștenit de cancer: testul privește celulele leucemiei, nu ADN-ul cu care te-ai născut.

Cum se face

Proba poate fi măduvă osoasă extrasă cu un ac (aspirat de măduvă, cel puțin 1 ml), recoltată de medicul hematolog, de obicei odată cu puncția făcută pentru diagnostic, sau sânge din venă (sânge periferic, cel puțin 3 ml), ambele pe heparină de litiu. Se pot folosi și lame citogenetice necolorate, o suspensie de celule fixate sau țesut fixat în parafină (bloc sau 4–6 secțiuni). Medicul genetician îți cere înainte rezultatele analizelor făcute până atunci, de exemplu buletinul de analize al măduvei, analiza markerilor de pe suprafața celulelor (imunofenotiparea) și cariotipul, dacă există. Rezultatul vine, de obicei, în 9 zile lucrătoare de la primirea probei în laborator. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: hibridizare fluorescentă in situ (FISH)
• Variante raportate: rearanjamentele genei KMT2A (regiunea 11q23.3)
• Probă: sânge periferic recoltat pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml), măduvă osoasă recoltată pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml), suspensie de celule fixate (un tub pentru fiecare cultură), lame citogenetice necolorate (2 lame pentru fiecare sondă) sau țesut fixat în formol și inclus în parafină (FFPE; bloc sau 4–6 secțiuni)
• Durată: 9 zile lucrătoare

Context clinic

• Meyer și colab. (2023), recombinomul KMT2A al leucemiilor acute: peste 100 de gene partenere descrise.