Detecția prin FISH a deleției 5q31 (gena EGR1)

Pe scurt

Testul verifică, printr-o analiză la microscop cu sonde fluorescente (FISH), dacă regiunea 5q31 a cromozomului 5, în care se află gena EGR1, lipsește din celulele măduvei osoase. Deleția 5q este o modificare importantă în leucemia acută mieloidă și în sindroamele mielodisplazice (boli în care măduva produce celule de sânge care nu se maturizează corect), pentru încadrarea bolii și pentru alegerea tratamentului. Medicul hematolog îl cere mai ales când cariotipul nu a dat rezultat sau pentru a urmări o deleție cunoscută.

Ce analizează

Testul folosește un fragment scurt de ADN marcat cu o substanță fluorescentă (sondă), care se lipește doar de regiunea căutată; metoda se numește hibridizare fluorescentă in situ (FISH). La microscop, fiecare copie a genei EGR1 apare ca un punct luminos: o celulă normală are două, o celulă cu deleție are unul. Analiza se face pe nucleii celulelor care nu se divid, deci dă un răspuns și atunci când celulele nu cresc în cultură și cariotipul eșuează.

De ce tocmai 5q31: în bolile mieloide cu deleție 5q, o porțiune mică din banda 5q31 lipsește de obicei. Ea conține gena EGR1, iar sonda testului este plasată acolo.

Pentru cine este

• persoană cu leucemie acută mieloidă, la care cariotipul a eșuat și medicul hematolog vrea să verifice deleția 5q;
• persoană cu o boală mieloidă cu deleție 5q cunoscută, care cuprinde regiunea 5q31, pentru urmărirea ei după tratament;
• completarea unei analize anterioare, când doar regiunea 5q31 mai trebuie verificată.

Ce poate arăta rezultatul

• Deleție prezentă. Raportul dă procentul de celule cu deleție. În clasificarea OMS din 2022, deleția 5q este una dintre modificările care definesc leucemia acută mieloidă cu modificări legate de mielodisplazie și, când apare izolată și cu puține celule tinere (blaști), o formă aparte de sindrom mielodisplazic. Medicul hematolog folosește rezultatul la încadrarea bolii și la estimarea riscului.
• Deleție absentă. Regiunea 5q31 este prezentă în ambele copii. Rezultatul nu exclude o deleție 5q mai mică, care nu atinge gena EGR1.
• Rezultat la limită. Când procentul de celule cu modificarea este apropiat de pragul laboratorului, rezultatul se interpretează împreună cu celelalte analize.

Ce nu poate detecta

• O deleție 5q care nu cuprinde regiunea 5q31, de exemplu una limitată la 5q32-q33, unde se află gena RPS14; testul cu două regiuni le acoperă pe amândouă.
• Dacă deleția este izolată sau însoțită de alte modificări: pentru asta e nevoie de cariotipul complet.
• Schimbările din interiorul genelor (mutațiile), de exemplu din TP53, care se caută prin secvențierea mai multor gene deodată (panelul NGS pentru neoplasme mieloide).
• O deleție prezentă în prea puține celule, sub pragul laboratorului.

Cum se face

Proba este, de regulă, măduvă osoasă extrasă cu un ac (aspirat de măduvă, cel puțin 1 ml, pe heparină de litiu). O recoltează medicul hematolog, prin puncție-aspirație medulară, cu anestezie locală, de obicei în aceeași ședință cu celelalte analize ale măduvei. Laboratorul acceptă și sânge din venă (sânge periferic, cel puțin 3 ml, pe heparină de litiu), celule fixate, lame necolorate sau țesut inclus în parafină (FFPE). Rezultatul vine, de obicei, în 9 zile lucrătoare de la primirea probei. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: hibridizare fluorescentă in situ (FISH)
• Variante raportate: deleția 5q31 care cuprinde gena EGR1
• Probă: sânge periferic pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml), măduvă osoasă pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml), suspensie de celule fixate (un tub pentru fiecare cultură), lame citogenetice necolorate (2 lame pentru fiecare sondă) sau țesut fixat în formol și inclus în parafină (bloc FFPE sau 4–6 secțiuni)
• Durată: 9 zile lucrătoare

Context clinic

• Le Beau și colab. (1993): la 135 de pacienți cu boli mieloide, regiunea comună minimă pierdută se află în 5q31 (EGR1).
• Criteriul de alegere: sonda unică 5q31 pentru leucemia acută mieloidă și pentru urmărirea unei deleții cunoscute care cuprinde 5q31; în suspiciunea de sindrom mielodisplazic, testul cu două regiuni (HT-0144) vede și delețiile limitate la 5q32-q33 (RPS14).