Detecția prin FISH a translocației t(15;17) PML/RARA

Pe scurt

Testul caută, printr-o analiză la microscop cu sonde fluorescente (FISH), translocația t(15;17), care unește gena PML de pe cromozomul 15 cu gena RARA de pe cromozomul 17. Această fuziune definește leucemia acută promielocitară (LAP), o formă de leucemie acută mieloidă cu un tratament propriu. Se face de obicei dintr-o probă de măduvă osoasă, dar se poate face și din sânge, la indicația medicului hematolog, pentru confirmarea sau reevaluarea diagnosticului.

Ce analizează

Într-o translocație, doi cromozomi își schimbă între ei câte un fragment. În LAP, schimbul dintre cromozomii 15 și 17 lipește gena PML de gena RARA, iar gena nouă, PML::RARA, oprește maturarea unor celule albe tinere, promielocitele.

Testul folosește mici fragmente de ADN marcate cu o culoare fluorescentă (sonde), care se atașează de regiuni precise ale cromozomilor; metoda se numește hibridizare fluorescentă in situ (FISH). La microscop, în nucleele celulelor din probă, specialistul vede dacă genele PML și RARA au ajuns una lângă alta, adică dacă s-a produs fuziunea.

Conform MedlinePlus Genetics, fuziunea PML::RARA apare în până la 98% dintre cazurile de LAP; în câteva cazuri, gena RARA se unește cu alți parteneri.

Pentru cine este

• persoană cu leucemie acută promielocitară, pentru confirmarea genetică a diagnosticului, în paralel cu tratamentul început în spital;
• persoană cu leucemie acută mieloidă la care cariotipul nu a reușit sau nu a fost concludent;
• persoană cu un diagnostic de LAP pus anterior, pentru care se dorește o reevaluare a probei.

LAP este o urgență medicală. Conform recomandărilor European LeukemiaNet (ELN) din 2019, tratamentul specific începe imediat, la simpla suspiciune, fără să aștepte confirmarea genetică. Testul nu ține locul investigațiilor de urgență din spital.

Ce poate arăta rezultatul

• Pozitiv: fuziunea PML::RARA apare într-o parte dintre nucleele analizate, peste pragul laboratorului. Rezultatul confirmă genetic LAP și susține tratamentul specific, ales de medicul hematolog.
• Negativ: fuziunea nu s-a văzut. Dacă examenul măduvei sugerează totuși LAP, medicul hematolog decide ce teste mai sunt necesare, de exemplu pentru o translocație rară a genei RARA.
• Neconcludent: semnalele nu au putut fi citite; se poate cere o probă nouă.

Dacă testul se face la scurt timp după începerea tratamentului, celulele cu translocație pot fi încă vizibile pentru că se maturizează lent; conform ELN, acest lucru nu înseamnă că tratamentul a eșuat.

Ce nu poate detecta

• celulele leucemice puține rămase după tratament (boala reziduală măsurabilă), care se urmăresc prin PCR cantitativ;
• varianta exactă a fuziunii PML::RARA (tipul de transcript: bcr1, bcr2 sau bcr3), necesară pentru urmărirea ulterioară prin PCR;
• translocațiile rare ale genei RARA cu alți parteneri decât PML: după tipul sondei, ele pot scăpa sau pot apărea doar ca o rupere a genei RARA, fără partener;
• schimbările din interiorul genelor (mutațiile), de exemplu FLT3, care se caută prin teste moleculare;
• alte modificări ale cromozomilor, în afara regiunilor PML și RARA;
• unele modificări relevante, care pot rămâne neidentificate din cauza limitelor actuale ale tehnologiei sau ale cunoștințelor medicale; uneori, rezultatul nu este concludent.

Cum se face

Proba poate fi măduvă osoasă extrasă cu un ac (aspirat de măduvă, cel puțin 1 ml), recoltată de medicul hematolog, sau sânge din venă (sânge periferic, cel puțin 3 ml), ambele pe heparină de litiu; se acceptă și lame citogenetice necolorate, celule fixate sau țesut în parafină. La consultație îți explicăm cum se trimite proba. Rezultatul vine, de obicei, în 9 zile lucrătoare de la primirea probei în laborator. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: hibridizare fluorescentă in situ (FISH)
• Variante raportate: translocația t(15;17) dintre genele PML și RARA
• Probă: sânge periferic recoltat pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml), măduvă osoasă recoltată pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml), suspensie de celule fixate (un tub pentru fiecare cultură), lame citogenetice necolorate (2 lame pentru fiecare sondă) sau țesut fixat în formol și inclus în parafină (FFPE; bloc sau 4–6 secțiuni)
• Durată: 9 zile lucrătoare

Context clinic

• ELN 2019: tratamentul cu acid all-trans-retinoic (ATRA) începe la simpla suspiciune de LAP. Cu un termen de 9 zile lucrătoare, testul servește confirmării, încadrării, reevaluării și celei de-a doua opinii, nu diagnosticului de urgență.