Detecția prin FISH a deleției ATM (11q22.3)

Pe scurt

Testul verifică, printr-o analiză la microscop cu sonde fluorescente (FISH), dacă regiunea 11q22.3 a cromozomului 11, în care se află gena ATM, lipsește din celulele unei leucemii limfocitare cronice (LLC) sau ale unei boli înrudite. Deleția 11q este una dintre modificările pe care medicul hematolog le folosește pentru a estima evoluția bolii. Se face din sânge sau din măduvă și privește celulele bolnave, nu ADN-ul moștenit.

Ce analizează

Gena ATM ajută celula să repare rupturile ADN-ului. În unele leucemii, celulele bolnave pierd o porțiune din brațul lung al cromozomului 11 care conține această genă.

Testul folosește un fragment scurt de ADN marcat cu o substanță fluorescentă (sondă), care se lipește doar de regiunea căutată; metoda se numește hibridizare fluorescentă in situ (FISH). La microscop, fiecare copie a genei ATM apare ca un punct luminos: o celulă normală are două, o celulă cu deleție are unul. Analiza se face pe nucleii celulelor care nu se divid, deci în LLC limfocitele bolnave se pot analiza direct din sânge, iar laboratorul raportează procentul de celule cu deleție.

Pentru cine este

• persoană cu leucemie limfocitară cronică, în afara unei decizii de tratament, când medicul hematolog vrea să verifice doar regiunea ATM;
• persoană cu altă boală în care limfocitele B se înmulțesc anormal (boală limfoproliferativă cu celule B), la indicația medicului hematolog;
• completarea unei analize anterioare, când doar regiunea ATM mai trebuie verificată.

Conform ghidului iwCLL din 2018, înainte de începerea tratamentului se recomandă FISH din sânge pentru deleția 13q, deleția 11q, deleția 17p și trisomia 12. Pentru această evaluare se alege, de regulă, panelul care le cuprinde pe toate patru, nu testul pentru o singură regiune.

Ce poate arăta rezultatul

• Deleție prezentă. Raportul dă procentul de celule cu deleție. Rezultatul ajută medicul hematolog la planificarea urmăririi și a tratamentului.
• Deleție absentă. Gena ATM este prezentă în ambele copii în celulele analizate. Rezultatul nu spune nimic despre celelalte regiuni importante în LLC.
• Rezultat la limită. Când procentul de celule cu modificarea este apropiat de pragul laboratorului, rezultatul se interpretează împreună cu celelalte analize.

Ce nu poate detecta

• Modificările altor regiuni, cum sunt deleția 17p (gena TP53), deleția 13q sau trisomia 12.
• Schimbările unei singure „litere” din gena ATM (variantele punctiforme): când o copie lipsește, cealaltă poate purta o mutație, care se caută prin secvențiere.
• Variantele ATM moștenite, care cresc riscul pentru alte cancere; pentru ele există teste din ADN-ul moștenit.
• O deleție prezentă în prea puține celule, sub pragul laboratorului.

Cum se face

Proba este de sânge din venă (cel puțin 3 ml), recoltat într-un centru partener, sau de măduvă osoasă extrasă cu un ac de medicul hematolog (aspirat de măduvă, cel puțin 1 ml); ambele se recoltează pe heparină de litiu. Rezultatul vine, de obicei, în 9 zile lucrătoare de la primirea probei. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: hibridizare fluorescentă in situ (FISH)
• Variante raportate: deleția genei ATM (regiunea 11q22.3)
• Probă: sânge periferic pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml), măduvă osoasă pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml), suspensie de celule fixate (un tub pentru fiecare cultură), lame citogenetice necolorate (2 lame pentru fiecare sondă) sau țesut fixat în formol și inclus în parafină (bloc FFPE sau 4–6 secțiuni)
• Durată: 9 zile lucrătoare

Context clinic

• Döhner și colab. (2000): deleția 11q a fost găsită la 18% dintre pacienții cu LLC, cu boală mai avansată la momentul testării, și a fost, alături de deleția 17p, un factor prognostic independent.
• Înaintea unei decizii de tratament, iwCLL 2018 recomandă panelul FISH cu patru regiuni (13q, 11q, 17p, +12) și analiza mutațiilor TP53; testul pentru o singură regiune rămâne pentru completarea unei analize sau pentru urmărirea unei deleții cunoscute.