Detecția prin FISH a translocației t(9;22) BCR/ABL1

Pe scurt

Testul caută, printr-o analiză la microscop cu sonde fluorescente (FISH), translocația t(9;22), adică cromozomul Philadelphia, care unește gena BCR de pe cromozomul 22 cu gena ABL1 de pe cromozomul 9. Fuziunea BCR::ABL1 definește leucemia mieloidă cronică (LMC) și apare și în unele leucemii acute. Se face din sânge sau din măduvă osoasă, la indicația medicului hematolog.

Ce analizează

Cromozomii sunt „volumele” în care stau genele. Într-o translocație, doi cromozomi își schimbă între ei câte un fragment. În t(9;22), gena ABL1 ajunge lângă gena BCR, iar gena nouă produce o enzimă (tirozin-kinază) mereu activă, care împinge celulele din măduvă să se înmulțească. Pe această enzimă acționează un tratament țintit.

Testul folosește mici fragmente de ADN marcate cu o culoare fluorescentă (sonde), care se atașează de genele BCR și ABL1; metoda se numește hibridizare fluorescentă in situ (FISH). La microscop, în nucleele celulelor din probă, specialistul vede dacă cele două gene au ajuns una lângă alta, adică dacă s-a produs fuziunea. Analiza se face pe nuclee, așa că poate folosi și celulele din sânge, nu doar pe cele din măduvă.

Pentru cine este

• persoană cu LMC, la care testul PCR a găsit BCR::ABL1, dar cariotipul nu a arătat cromozomul Philadelphia;
• persoană cu leucemie acută limfoblastică, mai ales cu celule B, la care se caută fuziunea BCR::ABL1;
• persoană cu leucemie acută mieloidă, pentru încadrarea genetică a bolii;
• persoană cu LMC cu o variantă rară a fuziunii BCR::ABL1 (tip rar de transcript), care nu poate fi urmărită prin PCR cantitativ.

Ce poate arăta rezultatul

• Pozitiv: fuziunea BCR::ABL1 apare într-o parte dintre nucleele analizate. În LMC, rezultatul confirmă diagnosticul; în leucemia acută limfoblastică, conform National Cancer Institute, fuziunea poate fi uneori găsită doar prin FISH sau RT-PCR, iar tratamentul combină chimioterapia cu un tratament țintit. În leucemia acută mieloidă, ELN 2022 încadrează t(9;22) în grupa de risc nefavorabil.
• Negativ: fuziunea nu s-a văzut. Dacă medicul suspecta o boală mieloproliferativă, următorul pas poate fi căutarea mutațiilor din genele JAK2, CALR sau MPL.
• Neconcludent: proba nu a avut destule celule sau semnalele nu au putut fi citite; se poate cere o probă nouă.

Spre deosebire de secvențiere, FISH nu raportează variante de semnificație incertă. Decizia de tratament rămâne la medicul hematolog, iar la consultație îți explicăm ce înseamnă rezultatul.

Ce nu poate detecta

• varianta exactă a fuziunii BCR::ABL1 (tipul de transcript, de exemplu e13a2, e14a2 sau e1a2), stabilită prin PCR, care contează pentru urmărirea ulterioară;
• cantitatea foarte mică de celule bolnave rămase sub tratament, măsurată prin PCR cantitativ din sânge;
• schimbările din gena ABL1 (mutațiile) care explică rezistența la un medicament, găsite prin secvențiere;
• alte modificări ale cromozomilor, care se văd la cariotip;
• celulele bolnave sub pragul de detecție al metodei.

Cum se face

Testul se face pe sânge periferic recoltat pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml) sau pe aspirat de măduvă osoasă recoltat pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml), prin puncție medulară, de medicul hematolog; se pot trimite și celule fixate, lame necolorate sau țesut inclus în parafină (FFPE). Ce probă se potrivește depinde de întrebare și se stabilește împreună cu medicul. Rezultatul vine, de obicei, în 9 zile lucrătoare de la primirea probei în laborator. Consultațiile de genetică medicală dinainte și de după test și interpretarea rezultatului sunt incluse în preț.

Pentru medici

• Metodă: hibridizare fluorescentă in situ (FISH)
• Variante raportate: translocația t(9;22) dintre genele BCR și ABL
• Probă: sânge periferic recoltat pe heparină de litiu (cel puțin 3 ml), măduvă osoasă recoltată pe heparină de litiu (cel puțin 1 ml), suspensie de celule fixate (un tub pentru fiecare cultură), lame citogenetice necolorate (2 lame pentru fiecare sondă) sau țesut fixat în formol și inclus în parafină (FFPE; bloc sau 4–6 secțiuni)
• Durată: 9 zile lucrătoare

Context clinic

• ELN 2020: la diagnosticul LMC se fac cariotipul din măduvă și RT-PCR calitativ; FISH-ul se adaugă când PCR-ul arată BCR::ABL1 fără cromozom Philadelphia. Suspiciunea de LMC nu este, după ghid, o indicație pentru FISH ca prim test.
• Tratamentul țintit: inhibitorii de tirozin-kinază, în LMC și, împreună cu chimioterapia, în leucemia acută limfoblastică cu BCR::ABL1.